高效液相色谱仪原理，HPLCMSMS原理

本文目录一览

1，HPLCMSMS原理
2，高效液相色谱法
3，高校液相色谱分离原理是什么
4，高效液相色谱仪器原理是什么
5，elisa的基本原理
6，液相和气相色谱仪的原理和组成部件是什么

1，HPLCMSMS原理

HPLC是初分化合物，一级MS是对HPLC谱图中的各峰进行质谱分析，二级MS是对一级MS中有疑问的峰进行在一个解离分析以确定一级MS的不确定峰的结构。

ms/ms代表二级质谱，是将经过第一次质谱检测的离子以某种方式碎裂后再进行质谱检测。

HPLCMSMS原理

2，高效液相色谱法

盐析原理 :一些物质比如蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。盐析 1.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程。 2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。 3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂）

高效液相色谱法

3，高校液相色谱分离原理是什么

分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离，分离过程是一个分配平衡过程。高效液相色谱主要有4种，下面分别描述一下。1、液-固吸附色谱。固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相是吸附作用差异来分离的。吸附作用越强，K值越大保留时间越长。2、液-液分配色谱。顾名思义，它是将固定液涂在担体上作为固定相的，它的分离原理与液液萃取的原理相同，从而服从分配定律。在固定液中溶解度大，K值大，保留时间长3、离子交换色谱。是离子交换树脂上可电离的离子与具有相同电荷的被测离子可逆交换，由于被测离子在不同交换剂上具有不同的亲和力而使子分离，亲和力越强，K值越大保留时间越长。4、排阻色谱。固定相是多孔凝胶，内布孔隙，分子大于孔隙的不能进入固定相，直接从表面流过，几乎没有保留，小分子的物质可自由进出孔隙完全不受排阻，保留时间长。中等体积的分子介于两种情况之间。分离顺序只与分子的尺寸有关。对于反相色谱，极性越小的物质，流动相的极性越大，保留时间越长。极性越小的物质，流动相的极性越小，保留时间越短。对于极性大的物质来说，流动相的极性对其保留时间影响较小，而正相色谱正好相反。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

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高校液相色谱分离原理是什么

4，高效液相色谱仪器原理是什么

高效液相色谱仪主要的组成部件为高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器和色谱数据处理装置。1.高压输液泵由于高效液相色谱所使用的色谱柱一般装填小于10μm的固定相颗粒，故对流动相有较大的阻力，所以对于泵的耐压有一定的要求。除此之外，对于输液泵还有泵体材料耐化学腐蚀、输出流量范围宽、输出流量稳定等要求。高压输液泵可以分为恒压泵和恒流泵两大类。恒压泵是指输出恒定压力的泵，当系统阻力不变时可以保持恒定流量，但系统阻力发生变化时，就会影响到系统流量稳定，因此现在基本已不使用。恒流泵是指可输出恒定体积流量的泵，又分为注射型泵和往复式柱塞泵两类。注射型泵由于其工作过程中需停流吸液以及价格昂贵等原因，目前基本不用于高效液相色谱仪中。往复式柱塞泵则可以提供低脉动的连续稳定液流，广泛应用于各种商品化仪器中，并衍生出了双柱塞往复式并联泵、双柱塞往复式串联泵、双柱塞独立驱动的往复式串联泵等多种设计。2.进样装置在HPLC分析中由于使用了高效颗粒填料和高压的流动相，因而对样品的进样方式要求提高，需要使样品在进入色谱柱头时准确地注人其上端填料的中心，形成集中的一点，以保证扩散效应影响降到最低。为实现以上要求有两种设计：停流进样和六通阀进样，但现在停流进样技术已经完全被简单易用的六通阀进样方式所取代。3.色谱柱色谱柱一般使用内壁抛光的直型不锈钢管作为柱管以获得高柱效。当使用粗内径短柱和细内径色潜柱时，需要注意柱外效应所引起的色谱峰展宽，应该尽量缩短进样器至检测器之间的连接管路，以获得更小的柱外死体积。HPLC色谱柱装填的固定相，其基体材料多为全多孔球形或无定形的硅胶颗粒，在高压下使用匀浆装柱法装填，并在色谱柱两端使用多孔不锈钢烧结材料的过滤片以阻挡流动相中的微小机械杂质进入，并防止固定相流失。4.检测器检测器主要用于检测经色谱柱分离后的组分浓度变化。常用的检测器为紫外/可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器等。5.色谱数据处理装置高效液相色谱的分析结果数据现已广泛使用色谱数据工作站来记录和处理。色谱工作站基于微型计算机的硬件，可以实现如下功能：(1) 仪器操作参数的控制功能——色谱仪的所有可控参数，均可预先设定并保存记录，在运行样品时自动调用并传输至仪器。(2) 数据采集和处理功能——可通过计算机和仪器之间的数据传输接口自动采集色谱数据。并根据指定处理参数进行数据处理，提供色谱图的相关积分数据，还可以选择不同的标准计算方式来对样品自动进行计算，得到定性或定量的结果。还具有计算柱效、绘制工作曲线等其他功能。

5，elisa的基本原理

ELISA的原理：ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的灵敏度。1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附测定（enzymelinkedimmunosorbentassay, ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。这种测定方法中有3种必要的试剂：1. 固相的抗原或抗体；2. 酶标记的抗原或抗体；3. 酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

ELISA基本原理是抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面;测定时，将待测样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原抗体复合物;反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)与待测标本中待检抗体或抗原的量呈一定比例;经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。

eilsa主要是基于抗原或抗体能吸附至固相载体的表面并保持其免疫活性，抗原或抗体与酶形成的酶结合物仍保持其免疫活性和酶催化活性的基本原理。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。

ELISA即酶联免疫吸附实验，原理：包被抗体或抗原，然后加入待检物，里面的抗原或抗体与包被板上产生特异性结合，再通过酶来催化显色反应，显色反应后的吸光度OD值与酶的量相关，而酶的量与待检物相关，故可以检测待检物含量。具体方法有直接法，间接法，竞争法，捕获法，阻断法等。

6，液相和气相色谱仪的原理和组成部件是什么

液相色谱仪：色谱分离基本原理：在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。高效液相色谱仪可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。高压输液泵功能驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统；性能要求流量稳定（±1），耐高压（30～60Mpa），耐各种流动相：例如：有机溶剂、水和缓冲液；种类往复泵和隔膜泵。色谱柱功能分离样品中的各个物质；尺寸 10～30cm长，2～5mm内径的内壁抛光的不锈钢管柱；填料粒度 5 ～ 10μm ，高效微粒固定相；进样器功能将待分析样品引入色谱系统；种类 ①注射器，10Mpa以下，1～10μm微量注射器进样 ②停流进样 ③阀进样，常用、较理想、体积可变，可固定 ④自动进样器，有利于重复操作，实现自动化检测器功能将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信号；分类 ①示差折光化学检测器 ②紫外吸收检测器 ③紫外一可同分光光度检测器 ④二极管阵列紫外检测器 ⑤荧光检测器 ⑥电化学检测器馏分收集器功能如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析，而是为了做其它波谱鉴定，或获取少量试验样品的小型制备，馏分收集是必要的；方法 ①手工，少数几个馏分，手续麻烦，易出差错。 ②馏分收集器收集，比较理想，微机控制操作准确。数据获取和处理系统功能把检测器检测到的信号显示出来气相色谱仪： GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离，其过程如图气相分析流程图所示。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体流动相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来。也正是由于载气的流动，使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附，结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。当组分流出色谱柱后，立即进入检测器。检测器能够将样品组分的与否转变为电信号，而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。当将这些信号放大并记录下来时，就是气相色谱图了。（1）载气系统气相色谱仪中的气路是一个载气连续运行的密闭管路系统。整个载气系统要求载气纯净、密闭性好、流速稳定及流速测量准确。（2）进样系统进样就是把气体或液体样品速而定量地加到色谱柱上端。（3）分离系统分离系统的核心是色谱柱，它的作用是将多组分样品分离为单个组分。色谱柱分为填充柱和毛细管柱两类。（4）检测系统检测器的作用是把被色谱柱分离的样品组分根据其特性和含量转化成电信号，经放大后，由记录仪记录成色谱图。（5）信号记录或微机数据处理系统近年来气相色谱仪主要采用色谱数据处理机。色谱数据处理机可打印记录色谱图，并能在同一张记录纸上打印出处理后的结果，如保留时间、被测组分质量分数等。（6）温度控制系统用于控制和测量色谱柱、检测器、气化室温度，是气相色谱仪的重要组成部分。

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