悬浮培养，植物细胞悬浮培养的影响因素有哪些

本文目录一览

1，植物细胞悬浮培养的影响因素有哪些
2，什么是微载体悬浮培养
3，哪些类型的细胞可用于悬浮培养
4，植物悬浮细胞能不能够在静止状态下进行培养
5，什么是悬浮培养
6，细胞悬浮培养技术

1，植物细胞悬浮培养的影响因素有哪些

温度，PH，无菌环境，光照，植物激素的比例营养物质浓度等等

药用植物次生代谢产物的五种生产途径。1、直接从植物中提取次生代谢产物；2、化学合成模拟；3、微生物(细菌或真菌)发酵；4、利用植物组织和细胞培养法生产次生代谢产物；5、利用基因工程生产次生代谢产物。

植物细胞悬浮培养的影响因素有哪些

2，什么是微载体悬浮培养

在流动的液体培养基中培养非贴壁的悬浮细胞或小细胞团的细胞或组织的培养方法。细胞附着在微运载体上的培养也是一种悬浮培养。非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。细胞悬浮于培养基中生长或维持。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以子。深度超过5mm，需要搅动培养基，超过10cm，还需要深层通入CO2和空气，以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。

百度一个贴吧里有关于微载体的介绍，很详细，你可以看一看。链接：http://tieba.baidu.com/f?kz=812463636

什么是微载体悬浮培养

3，哪些类型的细胞可用于悬浮培养

高等动物细胞悬浮培养主要是免疫系统的细胞,因为这些细胞不需要细胞间和细胞与培养表面的接触.常见的有Jurkat（人的T细胞）,J774 （鼠单核细胞）等等.当然从人或者动物身上提取出来的免疫细胞也可以悬浮培养,不过养这些需要刺激,而且养不长.细菌细胞也可以悬浮培养,如E.coli

骨髓的细胞，白血病细胞等是可以悬浮培养的。做好悬浮细胞培养药注意以下几点：1. 避免污染,在超净台内操作,操作前半小时先进行紫外杀菌.2. 所有用品高温灭菌,或者进行70%酒精擦洗.3. 培养过程中,每隔一段时间取出一部分细胞冷冻保存,以防污染后没有细胞可以用.

高等动物细胞悬浮培养主要是免疫系统的细胞，因为这些细胞不需要细胞间和细胞与培养表面的接触。常见的有Jurkat（人的T细胞）， J774 （鼠单核细胞）等等。当然从人或者动物身上提取出来的免疫细胞也可以悬浮培养，不过养这些需要刺激，而且养不长。细菌细胞也可以悬浮培养，如E.coli

哪些类型的细胞可用于悬浮培养

4，植物悬浮细胞能不能够在静止状态下进行培养

植物悬浮细胞能不能够在静止状态下进行培养实验原理:植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织县浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后，可形成分散县浮培养物。良好的县浮培养物应具备以下特征：（1）主要有单细胞和小细胞团组成；（2）细胞具有量盛的生长和分裂能力，增殖速度快；（3）大多数细胞在形态上应具有分生细胞的特征，它们多呈等径形，核一质比率大，胞质浓厚，无液胞化程度较低。在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养，因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说，细胞在培养到第18～25d 时达到最大的密度，此时应进行第一次继代培养。在继代培养时，应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作，特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株，即可获得携带有目标基因的个体。主要试剂:B5培养基加上0.2mg NAA（naphthalene acetic acid）的液体培养基（取3.2g B5粉末培养基，蔗糖30g，200ul体积质量为1mg/ml的NAA贮备液，溶于约800ml蒸馏水中，置于磁力搅拌器上混合均匀，pH计测定pH 值，1mol/l KOH调节pH值至5.8，加蒸馏水定容至1L，铝箔纸封口后121℃灭菌20min，贮于4℃冰箱，接种前水浴或自然升至室温）。

不能,一方面植物细胞代谢活动需要氧气，一般需要搅拌畅耽扳甘殖仿帮湿爆溅增加溶解氧。另一方面，植物细胞培养一般为的是取得细胞代谢产物或次级代谢产物，静止状态下进行培养不利于这些产物的排出。此外静止状态下容易形成细胞团。

5，什么是悬浮培养

非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。细胞悬浮于培养基中生长或维持。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以子。深度超过5mm，需要搅动培养基，超过10cm，还需要深层通入CO2和空气，以保证足够的气体交换。通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点，比如在培养过程中，植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布，而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响，从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点，当植物的组织在液体培养基中生长时，我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养，在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡，一般可用100～120 r/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡，使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的，既有游离的单个细胞，也有较大的细胞团块，还有接种物的死细胞残渣。在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养，因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说，细胞在培养到第18～25d 时达到最大的密度，此时应进行第一次继代培养。在继代培养时，应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作，特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株，即可获得携带有目标基因的个体。

6，细胞悬浮培养技术

植物细胞悬浮培养实验方法1.用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌MS培养基10~15ml，每瓶接种1~1.5g愈伤组织，以保证最初培养物中有足够量的细胞。2.将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min，25~28℃条件下，进行振荡培养。3.经6~10天培养后，若细胞明显增殖，可向培养瓶中加新鲜培养基10ml，必要时，可用大口移液管将培养物分装成两瓶，继续培养。（若细胞无明显增殖，可能是起始材料不适当，应考虑用旺盛增殖期的愈伤组织重新接种）。可进行第一次继代培养。4.县浮培养物的过滤：按“3”法继代培养几代后，培养液中应主要由单细胞和小细胞团（不多于20个细胞）组成。若仍含有效大的细胞团，可用适当孔径的金属网筛过滤，再将过滤后的县浮细胞继续培养。5.细胞计算。取一定体积的细胞县液，加入2倍体积的8%的三氧化铬（CrO3），置700C水浴处理15min。冷却后，用移液管重复吹打细胞悬液，以使细胞充分分散，混匀后，取一滴县液置入血细胞计数板上计数。6.制作细胞生长曲线：为了解县浮培养细胞的生长动态，可用以下方法绘制生长曲线图：（1）鲜重法（fresh weigh method）在转代培养的不同时间，取一定体积的悬浮细胞培养物，离心收集后，称量细胞的鲜重，以鲜重为纵座标，培养时间为横座标，绘制鲜重增长曲线。（2）干重法（dry weigh method ）可在称量鲜重之后，将细胞进行曲烘干，再称量干重。以干重为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制细胞干重生长曲线。上述两种方法均需每隔2天取样一次，共取7次，每个样品重复三次，整个实验进行期间不再往培养瓶中换入新鲜培养液。7.细胞活力的检查。对于初学者，往往需要检测活细胞的比率。可在培养的不同阶段，吸取一滴细胞县液，放在载玻片上，滴一滴0。1%的酚藏花红溶液（用培养基配制）染色，在显微镜下观察。几活细胞均不着色，而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色，凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光，有经验的操作者，则可根据细胞形态，胞质环流判别细胞的死活。8.细胞再生能力的鉴定：为了解悬浮培养细胞是否仍具有再生能力，可将培养细胞转移到琼脂固化的培养基上，使基再形成愈伤组织，进而在分化培养基上，诱导植株的分化。

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