高效液相色谱法原理，高效液相的原理是什么

本文目录一览

1，高效液相的原理是什么
2，求简单介绍高效液相色谱
3，高效液相色谱法
4，高校液相色谱分离原理是什么
5，高效液相色谱仪器原理是什么
6，介绍高效液相色谱法入门知识

1，高效液相的原理是什么

利用液、固色谱原理，将组分用色谱柱事先分离，利用液、固分配原理，分离各组分，然后通过检定器检测，电脑记录电信号，放大、计算，给出结果。

高效液相的原理是什么

2，求简单介绍高效液相色谱

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术.简单地说，就是一种采用高压喷注，或是打成气溶胶然后进行物质分离和分析的一种方法，

求简单介绍高效液相色谱

3，高效液相色谱法

盐析原理 :一些物质比如蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。盐析 1.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程。 2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。 3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂）

高效液相色谱法

4，高校液相色谱分离原理是什么

分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离，分离过程是一个分配平衡过程。高效液相色谱主要有4种，下面分别描述一下。1、液-固吸附色谱。固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相是吸附作用差异来分离的。吸附作用越强，K值越大保留时间越长。2、液-液分配色谱。顾名思义，它是将固定液涂在担体上作为固定相的，它的分离原理与液液萃取的原理相同，从而服从分配定律。在固定液中溶解度大，K值大，保留时间长3、离子交换色谱。是离子交换树脂上可电离的离子与具有相同电荷的被测离子可逆交换，由于被测离子在不同交换剂上具有不同的亲和力而使子分离，亲和力越强，K值越大保留时间越长。4、排阻色谱。固定相是多孔凝胶，内布孔隙，分子大于孔隙的不能进入固定相，直接从表面流过，几乎没有保留，小分子的物质可自由进出孔隙完全不受排阻，保留时间长。中等体积的分子介于两种情况之间。分离顺序只与分子的尺寸有关。对于反相色谱，极性越小的物质，流动相的极性越大，保留时间越长。极性越小的物质，流动相的极性越小，保留时间越短。对于极性大的物质来说，流动相的极性对其保留时间影响较小，而正相色谱正好相反。高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

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5，高效液相色谱仪器原理是什么

高效液相色谱仪主要的组成部件为高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器和色谱数据处理装置。1.高压输液泵由于高效液相色谱所使用的色谱柱一般装填小于10μm的固定相颗粒，故对流动相有较大的阻力，所以对于泵的耐压有一定的要求。除此之外，对于输液泵还有泵体材料耐化学腐蚀、输出流量范围宽、输出流量稳定等要求。高压输液泵可以分为恒压泵和恒流泵两大类。恒压泵是指输出恒定压力的泵，当系统阻力不变时可以保持恒定流量，但系统阻力发生变化时，就会影响到系统流量稳定，因此现在基本已不使用。恒流泵是指可输出恒定体积流量的泵，又分为注射型泵和往复式柱塞泵两类。注射型泵由于其工作过程中需停流吸液以及价格昂贵等原因，目前基本不用于高效液相色谱仪中。往复式柱塞泵则可以提供低脉动的连续稳定液流，广泛应用于各种商品化仪器中，并衍生出了双柱塞往复式并联泵、双柱塞往复式串联泵、双柱塞独立驱动的往复式串联泵等多种设计。2.进样装置在HPLC分析中由于使用了高效颗粒填料和高压的流动相，因而对样品的进样方式要求提高，需要使样品在进入色谱柱头时准确地注人其上端填料的中心，形成集中的一点，以保证扩散效应影响降到最低。为实现以上要求有两种设计：停流进样和六通阀进样，但现在停流进样技术已经完全被简单易用的六通阀进样方式所取代。3.色谱柱色谱柱一般使用内壁抛光的直型不锈钢管作为柱管以获得高柱效。当使用粗内径短柱和细内径色潜柱时，需要注意柱外效应所引起的色谱峰展宽，应该尽量缩短进样器至检测器之间的连接管路，以获得更小的柱外死体积。HPLC色谱柱装填的固定相，其基体材料多为全多孔球形或无定形的硅胶颗粒，在高压下使用匀浆装柱法装填，并在色谱柱两端使用多孔不锈钢烧结材料的过滤片以阻挡流动相中的微小机械杂质进入，并防止固定相流失。4.检测器检测器主要用于检测经色谱柱分离后的组分浓度变化。常用的检测器为紫外/可见光检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器等。5.色谱数据处理装置高效液相色谱的分析结果数据现已广泛使用色谱数据工作站来记录和处理。色谱工作站基于微型计算机的硬件，可以实现如下功能：(1) 仪器操作参数的控制功能——色谱仪的所有可控参数，均可预先设定并保存记录，在运行样品时自动调用并传输至仪器。(2) 数据采集和处理功能——可通过计算机和仪器之间的数据传输接口自动采集色谱数据。并根据指定处理参数进行数据处理，提供色谱图的相关积分数据，还可以选择不同的标准计算方式来对样品自动进行计算，得到定性或定量的结果。还具有计算柱效、绘制工作曲线等其他功能。

6，介绍高效液相色谱法入门知识

楼主，您好。高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入进样阀的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。采用微柱液相色谱系统可以减少溶剂的消耗并达到快速分离之目的。高效液相色谱法的主要分离机制有吸附、分配、离子交换和排阻作用。 1．对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。（1）色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等因素）以及色谱柱的填充，将直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在150？以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在300？以上的填料。以硅胶为载体的键合固定相填充剂适用pH2～8的流动相。当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。（2）检测器最常用的检测器为紫外吸收检测器，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测物的质量有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物结构均有响应；蒸发光散射检测器属质量型检测器，对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱管制和色谱峰纯度的检查。紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测物的质量呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。不同的检测器，对流动相的要求不同。当采用紫外检测器时，所用流动相应至少符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。（3）流动相由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不应低于5％，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。但对某些品种，必须用特定牌号的填充剂方能满足分离要求，可在该品种项下注明。 2．系统适用性试验色谱中最难分离物质对或与其相关的物质对的分离度和待测物响应值的重复性是系统适用性试验的重要参数。按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品对色谱系统进行试验和调整，应符合要求；或规定色谱条件下的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。（1）色谱柱的理论板数（n）在规定的色谱的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（Wh/2），按n＝5.54（tR/Wh/2）2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的效果等），使理论板数符合要求。（2）分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）的计算公式为：式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的峰宽。除另有规定外，分离度应大于1.5。（3）重复性取各品种项下的对照溶液，连续进样3～5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%。也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子。其相对标准偏差也应不大于2.0%。（4）拖尾因子为保证测量精度，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为：式中W0.05h为0.05峰高处的峰宽； d1为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95～1.05之间。 3．测定法定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但测定杂质含量时，须采用峰面积法。（1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：校正因子式中AS为内标物质的峰面积或峰高； AR为对照品的峰面积或峰高； CS为内标物质的浓度； CR为对照品的浓度。再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：含量式中AX为供试品（或其杂质）峰面积或峰高； CX为供试品（或其杂质）的浓度； A′S为供试品溶液中内标物质的峰面积或峰高； C′S为供试品溶液中内标物质的浓度； f为校正因子。当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，CS=C′S，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。（2）外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：含量式中各符号意义同上。由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环或自动进样器进样为好。（3）加校正因子的主成分自身对照法测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分自身对照法。在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述（1）法计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文中，用于校正杂质的实测面积。这些需作校正计算的杂质，通常以主成分为参照采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种正文中。测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节检测灵敏度（以噪声水平可接受为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液中的主成分色谱峰高约达满量程的10%～25%或其峰面积能准确积分（通常含量低于0.5%的杂质，峰面积的RSD应小于10%；含量在0.5%～2%的杂质，峰面积的RSD应小于5%；含量大于2%的杂质，峰面积的RSD应小于2%）。然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液的记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。详情请参考国家标准物质网 www.rmhot.com （4）不加校正因子的主成分自身对照法当没有杂质对照品时，可采用不加校正因子的主成分自身对照法。同上述（3）法配制对照溶液并调节检测灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离，则按规定先记录供试品溶液的色谱图Ⅰ，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。色谱图Ⅰ上杂质峰的总面积（包括溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。然后依法计算。（5）面积归一化法由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。方法是测量个杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各杂质峰面积及其之和占总峰面积的百分率。求采纳

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